生物安全柜操作规程

一、

Ⅱ级A2型生物安全柜，是用于对人员、受试样本及环境进行保护且能满足操作生物危害等级为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级致病因子要求的生物安全柜。生物安全柜开口处的负压风幕用以阻止污染气溶胶外溢，从而起到保护人员的作用。经高效过滤器过滤的垂直单向气流，向实验操作提供优于级的洁净气流，从而起到保护操作对象的作用。经高效过滤器过滤后排放的气体已充分滤除了微生物和尘埃，从而起到保护环境的作用。

我科室使用的Ⅱ级A2型生物安全柜，工作窗口进风气流和工作区垂直气流混合后进入安全柜上部的箱体，一部分气流经高效过滤器过滤后重新送至工作区；另一部分气流经过高效过滤器过滤后排至实验室。生物安全柜左右墙体及后侧墙体均为双层墙体结构，其中空部分均为负压风道，既有效降低了生物安全柜的内部结构阻力，又使操作区与外界环境具有双层墙体，且使操作区被负压立体包络，多重措施，可靠地保证了污染气溶胶不产生外溢。安全柜工作原理图如下图：

二、生物安全柜的使用

班前准备：

开始工作之前，考虑实验中的操作步骤和所需设备，准备一张实验室工作所需要的材料清单。

接通安全柜的电源，检查生物安全柜的相关指标，如风速、气流量和负压等，这些指标均应在正常范围内。若出现异常应停止使用，进行检修工作。

使用生物安全柜时，不要打开玻璃观察窗，先开启紫外灯对工作区进行消毒30min（期间，工作人员需离开实验室）。

消毒完成后抬起前窗至指定高度，将已经用75％乙醇消毒过的工作所需物品放入，开启安全柜的日光灯和风机机5min--10min，等待安全柜内的空气得到净化并且气流稳定。

开始操作前，要先调整好凳子或椅子的高度，以确保操作者的脸部在工作窗口之上。

工作人员需戴乳胶手套包裹长袖工作服，将双臂伸入安全柜静止至少1min，待安全柜内气流稳定后再开始操作。操作期间其他人员尽量减少房间内的走动，保证其正常气流。

班后工作：

实验结束后，关闭日光灯，风机继续运转5min使设备自净，接着将包括仪器设备在内的生物安全柜内所有物品用75％乙醇进行表面消毒后再移出生物安全柜，再次用75％乙醇清洁工作台面、工作区内壁、玻璃窗内侧及灯管，风机应仍保持运行状态。

关闭前窗，风机也自动关闭，开启紫外灯消毒对工作区进行消毒30min（期间，工作人员需离开实验室）。

关闭风机及电源。

三、生物安全柜的维护

每次使用完后用75％乙醇擦拭设备内表面，用柔性的清洁剂或玻璃专用清洁剂擦拭玻璃及仪器外表面，严格进行清洁保养。

生物安全柜允许24h连续工作，但在不使用时尽量关闭。

在工作完成后，应至少让生物安全柜继续工作5mm来完成“净化”的过程，即应留出将污染的空气排出生物安全柜的时间。

用紫外灯，应每周进行清洁以除去可能影响其杀菌效果的灰尘和污垢，三个月要检查一次紫外线的强度以确保有适当的光发射量。

四、生物安全柜内的溢洒

生物安全柜内样品发生少量喷溅时，应立即用吸水纸巾清除，并放入生物危害灭菌袋。

尽快对喷溅物沾染到的物品和安全柜内表面用浸透消毒液的毛巾覆盖，30min后清除吸水纸巾并用酒精再次消毒，最后用清水擦拭。

消毒工作结束后，用免洗手消毒液洗手并更换手套。

大量的溢出可能导致溢出液流入工作台面前格栅，这时需要更广泛的消毒，柜中所有的物品应进行表面消毒后移出柜外，要向工作台面上倾倒消毒液使其流入格栅到达集液槽。

不锈钢在氯离子环境下较易受到腐蚀，消毒工作结束后请将工作台面上再次用清水擦干。

一旦在生物安全柜中发生生物危害物品溢洒时，应在处理过程中尽量减少气溶胶的生成。所有接触溢洒物品的材料都要进行消毒和（或）高压灭菌。

临床实验室中要张贴处理溢洒物的实验室操作规程，每一位使用实验室的成员应阅读并理解这些规程。

五、生物安全柜的校验

在安装时或每隔一定时间，应由有资质的专业人员按照生产商的说明对生物安全柜的整体运行性能进行认证，以检查其是否符合国家及国际的性能标准。

生物安全柜防护效果的评估应该包括对生物安全柜的整体、HEPA过滤器的泄漏、空气向下流动的速率、进口空气的速率、负压、换气次数、气流的稳定性（烟雾特征）以及警报和互锁系统进行测试。还可选择进行漏电、照度、紫外线强度、噪声水平以及震动性的测试。

在进行这些测试时，应由有资质的专业人员来进行。